培養細胞可能是一件棘手的事情?？紤]到它們來自生物體，它們具有特定類型的需求，使它們能夠在有利但人工的條件下繁殖。在他們選擇的媒體中確保營養豐富和溫度控制的環境是一個良好的開端。但是，如何保持健康的細胞，以便您可以執行成功的實驗？

鑒于細胞培養是基礎研究和藥物發現和開發中使用的主要工具之一，已經為各種細胞類型生成了過程和標準化方案。細胞活力程序和表征分析可以幫助維持適合您實驗的細胞。然而，細胞是生物，因此它們如何生長以及讓它們快樂的變化自然會有一些變化。

以下是加州大學伯克利分校細胞培養基金會主任Alison Killilea和ATCC產品線業務經理Kevin Grady的一些有用提示，旨在根據細胞培養中出現的共同挑戰保持細胞健康和快樂。

解決細胞污染問題

受污染的培養物可導致細胞減弱和死亡，或可改變影響實驗結果的表達模式和轉染效率。支原體對細胞培養實驗室來說是一個挑戰，因為感染不易察覺?？梢赃M行基于PCR的支原體檢測測定，或者必須使用核染色來觀察支原體所在的細胞膜上的點狀染色。所有培養物在使用前都應進行支原體檢測，特別是如果從另一個實驗室收到的話。

為了對抗污染，筆/鏈球是媒體的常見添加劑。但是，要注意不要使用抗生素，因為壓力會增加細胞的選擇和行為。筆/ strep還可以掩蓋污染問題，使其擴散。相反，確保無菌技術shou先用于防止任何污染。

無菌技術可能是任何細胞培養方案中**重要的一個方面。使用前后使用70％乙醇噴涂罩，在進入罩前噴涂手套，打開前噴灑介質瓶。諸如此類的無菌技術可在不使用壓力筆/鏈條的情況下保持細胞快樂和無污染。

知道你的細胞

為了保持愉快的文化，請始終使用或**少從推薦的媒體開始。某些細胞類型在適合它們的特定培養基中增殖更好。然而，無論使用何種介質，某些實驗條件都會使細胞受損。稀疏接種的細胞是不健康的，因為生長因子和其他激素的數量減少是由較少數量的細胞釋放的。為了克服這個問題，如果需要稀疏鋪板的細胞，在傳代細胞時使用20％條件培養基與80％新培養基結合，以提供激素的初始嗡嗡聲，使細胞在新環境中感覺舒適。

胎牛血清（FBS）是細胞培養的另一種重要生長培養基，其含有低抗體水平和更多生長因子，允許跨越不同細胞培養應用的靈活性。預測試和篩選FBS通過保持營養基質在傳代中保持穩定，有助于確保健康的細胞轉移。

細胞系維護

冷凍和解凍技術可以在右腳開始新細胞，或導致細胞死亡。冷凍細胞應使用相關的慢速冷卻裝置以每分鐘一度的速度進行。這會在細胞間產生均勻的凍結并限制冰晶的形成。可靠的冷凍機將使細胞保持恒定狀態，同時不會造成致命的凍融循環。

相反，解凍應在37度水浴中快速進行，然后重新懸浮在完全生長培養基中。創建標準化協議以使細胞保持**佳狀態。確保精確地遵循它們，不要偏離定時程序，導致在水浴中花費太多時間，或其他有害的延遲。

環境監測

強烈建議常規的環境監測習慣來測試實驗室的清潔度。在細胞培養罩中留下開放的瓊脂平板，氣流良好，然后孵育平板。如果罩子被正確清潔將是顯而易見的。可以使用培養箱進行相同的測試，將開放的培養基瓶儲存一段時間。確保使用具有良好層流的優質生物安全柜是任何細胞培養實驗室維持健康細胞培養而不受外界環境影響的重要特征。

對CO2和溫度變化進行培養箱檢查可以是保持細胞快樂的重要方面。如果他們的外部環境不穩定，那么他們也不會。因此，選擇能夠保持恒定CO2水平和溫度范圍的優質培養箱可以節省時間和潛在的細胞系。

維持細胞培養需要時間，耐心和適應性技術，以便為細胞的良好生長創造合適的環境。一旦掌握，健康的細胞培養可能是成功實驗的關鍵。